SLIRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-418350

概要

SLIRP（SRA stem-loop interacting RNA binding protein）は小型のミトコンドリアRNA結合因子で、LRPPRCと会合して、ミトコンドリア由来mRNAの転写後過程における安定化と協調的な取り扱いを担います。ミトコンドリア転写産物の恒常性を支えることで、SLIRPは酸化的リン酸化（OXPHOS）能力と呼吸鎖機能に寄与し、細胞のエネルギー代謝やミトコンドリアのストレス応答に影響を与えます。SLIRPの異常はミトコンドリアの遺伝子発現プログラムを乱し、神経筋疾患や代謝性疾患の機序に関係するミトコンドリア機能障害の表現型と関連づけられています。そのためSLIRPは、ミトコンドリアRNA制御、プロテオスタシス、生体エネルギー適応をつなぐ経路の研究対象となっています。

SLIRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSLIRP遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SLIRP内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SLIRPのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SLIRPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SLIRPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SLIRP欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SLIRPの機能に不可欠なSLIRPエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SLIRPゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SLIRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSLIRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SLIRP遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SLIRP HDRプラスミド（h）および SLIRP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSLIRPホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSLIRP標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。