SLC5A8 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403705-ACT

SLC5A8 (auch bekannt als SMCT1) kodiert einen natriumgekoppelten Monocarboxylat-Transporter, der die Aufnahme kurzkettiger Fettsäuren und anderer Monocarboxylate wie Laktat, Pyruvat und Nicotinat über die Plasmamembran vermittelt. Durch die Regulation der intrazellulären Verfügbarkeit dieser Metabolite verknüpft SLC5A8 Membrantransport mit dem zellulären Energiestoffwechsel und der epigenetischen Kontrolle, einschließlich Signalwegen, die durch histondeacetylasehemmende kurzkettige Fettsäuren beeinflusst werden. Seine Expression ist in der Krebsbiologie und in Modellen epithelialer Zellen häufig verändert, wobei die Transporteraktivität metabolische Umprogrammierung, Differenzierungsprogramme und Stressantworten beeinflussen kann. SLC5A8 ist zudem relevant für Studien zur Nährstoffsensorik und zur Physiologie von Barrieregeweben, da es an der Verarbeitung luminaler Monocarboxylate beteiligt ist.

SLC5A8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLC5A8-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SLC5A8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLC5A8-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLC5A8-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SLC5A8-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLC5A8-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SLC5A8-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SLC5A8-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLC5A8-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.