SLC35E3 Double Nickase Plasmid (h): sc-412539-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SLC35E3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SLC35E3 Double-Nickase-Plasmid (h) und SLC35E3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLC35E3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SLC35E3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-412539-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SLC35E3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-412539-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC35E3 kodiert ein vermutlich zur Solute-Carrier-Familie 35 gehörendes, nukleotidzuckertransporter-ähnliches Protein, dem eine Rolle bei der Handhabung von Nukleotidzuckern innerhalb des sekretorischen Weges zugeschrieben wird und das glykosylierungsassoziierte Prozesse im endoplasmatischen Retikulum und im Golgi-Netzwerk unterstützt. Indem SLC35E3 die Verfügbarkeit aktivierter Zuckerdonoren beeinflusst, kann es zur Biosynthese von Protein- und Lipidglykanen beitragen, was wiederum Membrantransport, Zell-Zell-Interaktionen und die Reifung von Rezeptoren beeinflussen kann. Veränderte Glykosylierung wird breit mit Immunregulation, Entwicklungsphänotypen und tumorassoziierten Veränderungen der Zellsignalgebung in Verbindung gebracht, wodurch SLC35E3 ein nützliches Ziel zur Untersuchung glykanabhängiger Biologie darstellt. Eine funktionelle Untersuchung von SLC35E3 kann helfen zu klären, wie die Transportkapazität für Nukleotidzucker mit der Golgi-Homöostase und zellulären Stressantworten verknüpft ist.
SLC35E3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLC35E3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLC35E3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLC35E3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLC35E3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.