Plásmido CRISPR de Activación (h) SLC12A9: sc-408925-ACT

SLC12A9 codifica un miembro de la familia 12 de transportadores de solutos, un grupo de proteínas relacionadas con el transporte de cationes y cloruro, implicadas en la regulación de la homeostasis iónica a través de membranas intracelulares y en el control del equilibrio osmótico, el pH y las respuestas del volumen celular. Mediante sus efectos sobre el manejo de cloruro y cationes alcalinos, SLC12A9 puede influir en el potencial de membrana y en vías de señalización acopladas a la adaptación al estrés y a la función de los orgánulos. La expresión alterada o los procesos de transporte iónico desregulados se asocian con frecuencia con la fisiología epitelial y neuronal, con una relevancia más amplia para trastornos en los que se ven afectados el equilibrio electrolítico y el control del volumen celular. En consecuencia, SLC12A9 resulta de interés para estudios mecanísticos que conecten las redes de transporte iónico con la regulación del estado celular en sistemas humanos.

SLC12A9 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC12A9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SLC12A9 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC12A9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC12A9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SLC12A9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC12A9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SLC12A9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SLC12A9 en células tumorales con expresión de SLC12A9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.