SIRT1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400085-LAC

SIRT1 codifica a sirtuina 1, uma desacetilase de proteínas dependente de NAD⁺ que coordena as respostas celulares ao estado nutricional, ao estresse oxidativo e aos danos no DNA. Ao desacetilar substratos como p53, fatores de transcrição FOXO, NF-κB e PGC-1α, a SIRT1 modula a acessibilidade da cromatina, a biogênese mitocondrial, a autofagia e a sinalização inflamatória em vias ligadas à homeostase metabólica. A atividade da SIRT1 interage com a sinalização AMPK–mTOR e com a regulação circadiana, moldando programas transcricionais que influenciam a sobrevivência e a diferenciação celular. A expressão ou atividade desregulada de SIRT1 tem sido associada à biologia do envelhecimento e a mecanismos relevantes para câncer, neurodegeneração e distúrbios metabólicos, o que sustenta seu uso frequente como um nó em estudos em nível de vias.

As Partículas de Ativação Lentivirais SIRT1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de SIRT1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais SIRT1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição SIRT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de SIRT1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo SIRT1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.