SIK1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401769-ACT

Die salzinduzierbare Kinase 1 (SIK1) ist eine Serin/Threonin-Kinase aus der Familie der AMPK-verwandten Kinasen, die cAMP/PKA-abhängige Signale weiterleitet, um Transkriptionsprogramme zu regulieren, die Stoffwechsel, zirkadiane Signalgebung und Stressantworten steuern. SIK1 moduliert die CREB/CRTC-Aktivität und trägt zur phosphorylierungsabhängigen Kontrolle transkriptioneller Koaktivatoren bei, wodurch extrazelluläre Reize mit Veränderungen der Genexpression in mehreren Zelltypen verknüpft werden. Über diese Signalwege beeinflusst SIK1 die zelluläre Energiehomöostase, Differenzierung und adaptive Reaktionen auf Umweltreize. Eine fehlregulierte SIK1-Signalübertragung wurde in krankheitsrelevanten Kontexten mit veränderter Stoffwechselregulation und aberranter Kontrolle der Transkription in Verbindung gebracht, was ihren Einsatz in mechanistischen Studien zur Kopplung von Signalübertragung und Transkription unterstützt.

SIK1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SIK1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SIK1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SIK1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SIK1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SIK1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SIK1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SIK1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SIK1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SIK1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.