Plásmido CRISPR de Activación (h) SIAH-2: sc-401503-ACT

SIAH2 codifica SIAH-2, una ligasa E3 de ubiquitina tipo RING que regula el recambio de proteínas al dirigir sustratos específicos hacia la ubiquitinación y la degradación proteasómica. SIAH-2 integra señales de hipoxia y de respuestas al estrés celular, y modula vías relacionadas con la señalización de HIF, la actividad de MAPK y el control del ciclo celular, influyendo así en programas transcripcionales, el metabolismo y la supervivencia. Mediante el control dependiente de ubiquitina de intermediarios de estas rutas, SIAH-2 puede reconfigurar redes de adhesión y motilidad y contribuir a la remodelación del microambiente tumoral. La expresión o actividad desregulada de SIAH2 se ha asociado con una adaptación alterada a la hipoxia y con cambios en la proteostasis en contextos relevantes para la biología del cáncer y otros trastornos vinculados al estrés.

SIAH-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SIAH2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SIAH-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SIAH2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SIAH2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SIAH-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SIAH2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SIAH-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SIAH-2 en células tumorales con expresión de SIAH2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.