SHP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400964-ACT

Il gene umano **NR0B2** codifica per la **small heterodimer partner (SHP)**, un recettore nucleare orfano atipico che è privo di un dominio di legame al DNA e funziona principalmente come corepressore trascrizionale. SHP modula la segnalazione dei recettori nucleari interagendo con partner quali **LRH-1 (NR5A2)**, **HNF4A**, **FXR (NR1H4)** e **PXR (NR1I2)**, contribuendo così a determinare l’omeostasi degli acidi biliari, il metabolismo di lipidi e glucosio e i programmi genici epatobiliari. Attraverso il controllo a feedback nell’asse **FXR–SHP**, aiuta a contenere la sintesi di acidi biliari guidata da **CYP7A1** e influenza reti trascrizionali mitocondriali e infiammatorie nei tessuti metabolici. Un’attività di SHP deregolata è stata collegata, in ambito di ricerca, a risposte allo stress colestatico, fenotipi di steatosi epatica non alcolica, vie dell’insulino-resistenza e biologia tumorale dell’epatocarcinoma, tramite un’alterata regolazione trascrizionale di proliferazione e apoptosi.

SHP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NR0B2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SHP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NR0B2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NR0B2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SHP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NR0B2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SHP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SHP nelle cellule tumorali con espressione di NR0B2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.