Plásmido Doble Nickase (h) SHIP-1: sc-400619-NIC

INPP5D codifica SHIP-1 (fosfatasa de inositol 5 que contiene el dominio de homología 2 de Src 1), una fosfatasa lipídica enriquecida en células hematopoyéticas que convierte PI(3,4,5)P3 en PI(3,4)P2, limitando así la amplitud y la duración de la señalización PI3K–AKT. Mediante interacciones con receptores inmunitarios fosforilados y proteínas adaptadoras, SHIP-1 modula la señalización del receptor Fc y del BCR, las respuestas a citocinas, la quimiotaxis y los programas de supervivencia en células mieloides y linfoides. Este nodo regulador influye en la homeostasis inmunitaria innata y adaptativa y se intersecta con vías que gobiernan la señalización inflamatoria y las decisiones sobre el destino celular. La actividad desregulada de INPP5D/SHIP-1 se ha vinculado con disfunción inmunitaria y con contextos de señalización oncogénica en la investigación de enfermedades hematológicas, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de la regulación de la vía PI3K.

SHIP-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus INPP5D en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de INPP5D. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de INPP5D. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con INPP5D alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.