Plasmide Double Nickase (m) SH-PTP2: sc-422503-NIC

Le gène murin *Ptpn11* code SH-PTP2 (SHP2), une phosphatase tyrosine protéique cytoplasmique à domaines SH2 tandem, qui relaie les signaux émanant des récepteurs à activité tyrosine kinase, des récepteurs aux cytokines et des récepteurs inhibiteurs immunitaires. En déphosphorylant des protéines d’ancrage clés et en modulant des complexes d’adaptateurs, SH-PTP2 favorise la signalisation RAS–MAPK/ERK et peut influencer la dynamique des voies PI3K–AKT et JAK–STAT, modelant les réponses de prolifération, de différenciation et de migration. L’activité de *Ptpn11* contribue à des programmes de signalisation du développement et de l’hématopoïèse, et la dérégulation des réseaux dépendants de SH-PTP2 est largement étudiée dans des modèles de signalisation aberrante des facteurs de croissance et de fonction des cellules immunitaires. En tant que régulateur nodal de la signalisation des phosphotyrosines, *Ptpn11* est fréquemment utilisé pour analyser les interactions entre voies, les contrôles par rétroaction et la transduction du signal spécifique au contexte dans des cellules et tissus murins.

SH-PTP2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ptpn11 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ptpn11. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ptpn11. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ptpn11.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.