SH-PTP2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400260-ACT

PTPN11 kodiert SH-PTP2 (SHP2), eine zytosolische Protein-Tyrosin-Phosphatase mit tandemartig angeordneten SH2-Domänen, die aktivierte Rezeptor-Tyrosinkinasen und Zytokinrezeptoren mit nachgeschalteter Signalübertragung koppelt. SHP2 ist ein zentraler positiver Regulator des RAS–MAPK/ERK-Signalwegs und trägt zur Modulation des PI3K–AKT-Signalwegs bei; dadurch prägt es Programme der Zellproliferation, des Überlebens, der Migration und der Differenzierung. Durch Dephosphorylierung von Docking-Proteinen und Feedback-Knoten beeinflusst SHP2 Signalstärke und -dauer in Netzwerken der Wachstumsfaktor- und Immunsignalgebung. Eine dysregulierte PTPN11-Aktivität und -Expression ist mit Entwicklungssyndromen und verschiedenen Krebskontexten assoziiert, was PTPN11 zu einem häufigen Ziel mechanistischer Studien zu onkogener Signalgebung und Resistenzschaltkreisen macht.

SH-PTP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PTPN11-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SH-PTP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PTPN11-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PTPN11-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SH-PTP2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PTPN11-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SH-PTP2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SH-PTP2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PTPN11-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.