SENP8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405158

Panoramica

SENP8 codifica una proteasi a cisteina che agisce come deneddilasi con specificità per i substrati coniugati a NEDD8 e contribuisce a mantenere l’omeostasi della via di NEDD8. Modulando lo stato di neddilazione delle ligasi cullin-RING, SENP8 influenza il turnover proteico dipendente dall’ubiquitina, la progressione del ciclo cellulare e la segnalazione responsiva allo stress. L’attività di SENP8 è inoltre collegata alla regolazione delle dinamiche di neddilazione delle culline dipendenti da DCN1 e al controllo complessivo della proteostasi. La disregolazione del ciclo di NEDD8 e dell’attività delle ligasi delle culline è stata associata a fenotipi oncogenici e a processi di neurosviluppo o neurodegenerativi, rendendo SENP8 un nodo rilevante per studi meccanicistici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SENP8 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SENP8 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SENP8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SENP8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SENP8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SENP8 per lo studio della segnalazione di SENP8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SENP8 critici per la funzione di SENP8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SENP8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SENP8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SENP8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SENP8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SENP8 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SENP8 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SENP8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SENP8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.