SENP5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404428-ACT

O SENP5 humano codifica uma protease específica de SUMO que catalisa a desSUMOilação e o processamento de precursores de SUMO, ajudando a manter a homeostase de SUMO em processos nucleares e associados às mitocôndrias. Ao reverter a conjugação de SUMO em substratos-chave, o SENP5 influencia a progressão do ciclo celular, a organização do fuso mitótico, as respostas a danos no DNA e programas transcricionais adaptativos ao estresse. A atividade do SENP5 está ligada à regulação da estabilidade proteica e da localização subcelular por meio da via de SUMO, em interseção com a degradação dependente de ubiquitina e com a sinalização associada à cromatina. A desregulação da função de proteases de SUMO, incluindo alterações na expressão ou na atividade de SENP5, tem sido associada a proliferação aberrante, instabilidade genômica e fenótipos de sinalização relevantes para câncer em modelos experimentais.

SENP5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SENP5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SENP5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SENP5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SENP5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SENP5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SENP5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SENP5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SENP5 em células tumorais com expressão de SENP5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.