SEMA4C Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422882

Panoramica

Sema4c codifica la semaforina-4C (SEMA4C), una molecola di guida transmembrana che segnala attraverso recettori della famiglia delle plexine per regolare la comunicazione cellula-cellula, la migrazione direzionale e il rimodellamento del citoscheletro. Nei tessuti murini, SEMA4C contribuisce a eventi di segnalazione dipendenti dal contatto che modellano il patterning neurale e influenzano le interazioni tra cellule immunitarie, collegando le vie delle semaforine a processi di sviluppo e infiammatori. Gli effetti a valle convergono frequentemente sulla regolazione delle GTPasi della famiglia Rho e su programmi associati alle MAPK che coordinano la dinamica dell’adesione e la motilità. Un’alterata segnalazione semaforina–plexina è stata associata a un rimodellamento tissutale disfunzionale e a cambiamenti nel microambiente immunitario, supportandone lo studio in modelli rilevanti per la malattia senza implicare esiti terapeutici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA4C (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sema4c in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sema4c insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sema4c a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SEMA4C.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sema4c per lo studio della segnalazione di SEMA4C, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sema4c critici per la funzione di SEMA4C
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sema4c per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SEMA4C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SEMA4C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sema4c. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SEMA4C Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SEMA4C (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sema4c per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sema4c definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.