SEMA3A Lentiviral Activation Particles (h): sc-400716-LAC

SEMA3A kodiert Semaphorin-3A, ein sezerniertes Leitsignal, das an Neuropilin- und Plexin-Rezeptoren bindet und so den Umbau des Zytoskeletts, gerichtete Migration und Neuritenauswuchs reguliert. Über die Semaphorin-Signalgebung beeinflusst SEMA3A die Axonführung, synaptische Verschaltungsmuster und Gefäßmusterbildung, indem es GTPasen der Rho-Familie und die nachgeschaltete Aktindynamik moduliert. In immunologischen und stromalen Kontexten kann SEMA3A die Zellwanderung und Adhäsion prägen und seine Aktivität mit entzündlichen Mikroumgebungen und Gewebeumbau verknüpfen. Eine fehlregulierte SEMA3A-Signalgebung wurde in neuroentwicklungs- und neurodegenerativen Prozessen, in Interaktionen zwischen Tumoren und ihrer Mikroumgebung sowie in der angiogeneseassoziierten Pathobiologie untersucht.

SEMA3A Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente SEMA3A-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

SEMA3A Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der SEMA3A-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen SEMA3A-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen SEMA3A-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.