Sel-1L Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403861-ACT

SEL1L codifica a Sel-1L, um componente central da maquinaria de degradação associada ao retículo endoplasmático (ERAD) que atua em parceria com a HRD1 para reconhecer, retrotranslocar e promover a eliminação proteassomal dependente de ubiquitina de proteínas secretórias e de membrana mal dobradas. Por meio dessa função, dá suporte à proteostase do RE, modula a sinalização da resposta a proteínas mal dobradas (UPR) e influencia a estabilidade de diversos substratos envolvidos em diferenciação e adaptação ao estresse. A atividade de SEL1L cruza-se com vias que controlam o controle de qualidade do RE, complexos de ligases de ubiquitina e a homeostase da via secretória — processos frequentemente perturbados em condições caracterizadas por estresse crônico do RE. A capacidade desregulada de ERAD e a expressão alterada de SEL1L têm sido investigadas em estudos de neurodegeneração, disfunção metabólica e biologia tumoral como mecanismos que ligam o estresse proteotóxico a decisões sobre o destino celular.

Sel-1L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SEL1L sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sel-1L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SEL1L em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SEL1L, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sel-1L. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SEL1L nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sel-1L no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sel-1L em células tumorais com expressão de SEL1L silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.