Plásmido CRISPR de Activación (h) SDF-1/CXCL12: sc-400268-ACT

CXCL12 (SDF-1/CXCL12) es una quimiocina CXC homeostática que señaliza principalmente a través de CXCR4 y CXCR7/ACKR3 para regular la quimiotaxis, la supervivencia celular y la organización tisular. Este eje coordina el tráfico de leucocitos, la retención de células madre y progenitoras hematopoyéticas en nichos de médula ósea, y el desarrollo vascular y neural mediante señalización downstream de PI3K–AKT, MAPK/ERK, JAK/STAT y vías dependientes de calcio. Los gradientes de CXCL12 moldean las interacciones tumor–estroma, los programas angiogénicos y el tropismo metastásico, y la señalización CXCL12–CXCR4 desregulada se implica en la patobiología inflamatoria y la infiltración de células inmunitarias. Como señal del microambiente, CXCL12 se estudia con frecuencia por su papel en la migración y adhesión celulares, y en la remodelación del nicho en ámbitos de investigación en cáncer, fibrosis e inmunología.

SDF-1/CXCL12 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CXCL12 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SDF-1/CXCL12 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CXCL12 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CXCL12, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SDF-1/CXCL12. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CXCL12 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SDF-1/CXCL12 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SDF-1/CXCL12 en células tumorales con expresión de CXCL12 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.