Plasmide Double Nickase (h) SCF: sc-416442-NIC

Le gène humain **KITLG** code le **facteur des cellules souches** (SCF), un ligand clé du récepteur tyrosine kinase **KIT** (CD117) qui régule la survie, la prolifération, la migration et la différenciation des progéniteurs hématopoïétiques, des mélanocytes, des cellules germinales et des mastocytes. La signalisation **SCF–KIT** active en aval les voies **PI3K–AKT**, **RAS–MAPK** et **JAK–STAT**, coordonnant le maintien des cellules souches et l’engagement de lignée au sein de niches tissulaires spécialisées. Une activité dérégulée de l’axe **KITLG/KIT** est impliquée dans des altérations de la biologie de la pigmentation, des anomalies du développement liées à l’infertilité, ainsi que dans des contextes hématologiques et de tumeurs solides dépendants de KIT, ce qui en fait un nœud central pour l’étude de la signalisation dépendante des facteurs de croissance et du contrôle microenvironnemental du destin cellulaire.

SCF Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KITLG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KITLG. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KITLG. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KITLG.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.