Particules Lentivirales d'Activation (m) Sc1: sc-420099-LAC

Le gène murin *Sparcl1* code Sc1 (SPARC-like 1), une glycoprotéine matricellulaire sécrétée qui module l’organisation de la matrice extracellulaire et les interactions cellule–matrice. Sc1 participe à la régulation de l’adhérence cellulaire, de la migration et du remodelage tissulaire via des signaux extracellulaires qui influencent la dynamique du cytosquelette et le comportement du stroma. L’expression de *Sparcl1* est souvent associée aux compartiments vasculaires et stromaux et est étudiée dans des contextes d’angiogenèse, de réparation des plaies et de régulation du microenvironnement médiée par les fibroblastes et l’endothélium. Une activité dérégulée de *Sparcl1*/Sc1 a été impliquée dans le remodelage pathologique et des interactions tumeur–stroma altérées, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques du contrôle, par la matrice, du phénotype cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales Sc1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Sparcl1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Sc1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Sparcl1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Sc1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Sparcl1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.