Plasmide CRISPR d'Activation (h) SART-3: sc-411332-ACT

Le gène humain **SART3** code **SART-3**, une protéine nucléaire de liaison à l’ARN impliquée dans l’assemblage et le recyclage du spliceosome, en soutenant la dynamique des snRNP U4/U6 et la fidélité de l’épissage des pré-ARNm. Par ses rôles dans le traitement de l’ARN et l’organisation nucléaire, SART-3 contribue à la régulation de programmes d’expression génique qui influencent la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress et la protéostasie. Des altérations de l’activité des facteurs d’épissage et une dérégulation du spliceosome sont des caractéristiques récurrentes de la biologie tumorale et de phénotypes liés à l’immunité, faisant de SART3 un point d’entrée utile pour étudier le remodelage du transcriptome dans des contextes pertinents pour les maladies. En tant qu’antigène immunogène décrit dans plusieurs cancers, SART-3 a également servi à explorer les liens entre le traitement de l’ARN et la présentation d’antigènes associés aux tumeurs, sans préjuger d’une utilité clinique.

SART-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SART3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SART-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SART3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SART3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SART-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SART3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SART-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SART-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de SART3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.