Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
SAPK4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400423
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SAPK4 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico SAPK4, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SAPK4 Antibody (E-7): sc-46678
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SAPK4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400423 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
MAPK13 codifica la proteina chinasi 4 attivata dallo stress (SAPK4), una chinasi Ser/Thr della famiglia p38 MAPK che trasduce segnali infiammatori e di stress ambientale in risposte trascrizionali e post-trascrizionali. SAPK4 contribuisce alla regolazione della segnalazione associata alle citochine, dei programmi di differenziamento cellulare e al controllo, dipendente dal contesto, di apoptosi e proliferazione attraverso la fosforilazione di effettori a valle. Nell’ambito della più ampia rete delle MAPK, MAPK13/SAPK4 interagisce con vie che modellano le risposte dell’immunità innata e la biologia epiteliale. Una segnalazione p38 MAPK deregolata, inclusa l’attività di MAPK13, è stata associata a fisiopatologie infiammatorie e a processi legati al cancro, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici della segnalazione da stress.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SAPK4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MAPK13 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MAPK13 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MAPK13 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SAPK4.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MAPK13 per lo studio della segnalazione di SAPK4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni MAPK13 critici per la funzione di SAPK4
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MAPK13 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal SAPK4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SAPK4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MAPK13. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal SAPK4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SAPK4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MAPK13 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MAPK13 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.