Sall4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401033-NIC

SALL4は、C2H2型亜鉛フィンガーをもつ転写因子Sall4をコードしており、多能性の維持を助けるとともに、自己複製、系譜決定、クロマチン状態を制御するネットワークを含む初期発生の遺伝子発現プログラムを調節します。Sall4はOCT4やNANOGなどの因子と協調して転写回路を構築し、さらにエピジェネティック制御因子とも相互作用して、胚発生過程におけるエンハンサーおよびプロモーター活性を形作ります。体細胞の文脈では、SALL4発現の破綻は分化や増殖シグナルの異常と関連し、複数の悪性腫瘍で報告されていることから、がん性の転写ネットワーク再配線を研究するうえで有用な標的となります。SALL4の遺伝学的改変は、幹細胞生物学、細胞運命転換、ならびに転写因子駆動型の遺伝子制御ネットワークの機構解析を支えます。

Sall4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SALL4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SALL4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SALL4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SALL4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。