Sall4 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-430262-ACT

マウスSall4は亜鉛フィンガー型転写因子をコードしており、初期胚発生および生殖細胞発生の過程で、多能性と自己複製プログラムを維持しつつ、系譜コミットメント（分化運命の決定）を協調的に制御します。Sall4は、OCT4/POU5F1、SOX2、NANOGとの制御的クロストークを含む幹細胞の中核転写ネットワークと統合して機能し、クロマチン状態や転写抑制／活性化モジュールにも影響を与えます。SALL4活性の破綻（制御異常）は、複数のモデル系において異常分化、発生表現型、腫瘍性の転写プログラムと関連しており、ステムネス、増殖、ならびに運命決定を研究する上で重要なノードとなっています。マウスでは、Sall4は遺伝子発現のエピジェネティック制御や、発生における遺伝子制御回路の分子論理を解析する目的で、しばしば用いられます。

Sall4 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Sall4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Sall4 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Sall4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSall4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Sall4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSall4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSall4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSall4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSall4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。