Sall4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401033-ACT

SALL4 は、胚性幹細胞の多能性、自己複製、ならびに初期発生におけるパターン形成の主要な制御因子である亜鉛フィンガー型転写因子 Sall4 をコードする。Sall4 は、幹細胞性を担う中核因子と協調して転写プログラムを統合し、クロマチン制御やエピジェネティック制御にも関与することで、系譜決定と増殖を制御する。ヒト細胞では、SALL4 発現の破綻は発生異常と関連し、分化の阻害や細胞周期制御に影響し得るがん原性の転写ネットワークの文脈でしばしば研究されている。これらの特性により、SALL4 は遺伝子制御回路、運命決定、ならびにがんに関連した転写リプログラミングを解析するための有用な結節点となる。

Sall4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SALL4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Sall4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SALL4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSALL4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Sall4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSALL4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSall4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSALL4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSall4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。