RUNX2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400183-ACT

RUNX2はRunt関連転写因子をコードしており、細胞外マトリックス産生、ミネラル化、細胞周期進行を制御する転写プログラムを統合的に調節することで、骨芽細胞系譜へのコミットメントおよび骨格発生のマスター制御因子として機能します。BMP/TGF-β、Wnt/β-カテニン、Hedgehog、MAPK各経路からのシグナルを統合し、骨形成とリモデリングに関与する下流遺伝子を制御します。RUNX2の発現や活性の異常は骨・軟骨の発生異常と関連し、いくつかのがんの文脈では分化状態の変化や浸潤性表現型との関連も報告されています。系譜を規定する因子として、RUNX2は間葉系分化や微小環境リモデリングを司る転写ネットワークの解析に広く用いられています。

RUNX2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RUNX2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RUNX2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RUNX2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRUNX2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RUNX2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRUNX2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRUNX2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRUNX2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRUNX2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。