Rubicon Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-432438-ACT
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Rubicon Plasmide di attivazione CRISPR (m) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- Rubicon CRISPR Activation Plasmid (m) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal Rubicon CRISPR Activation Plasmid (m) e dal Rubicon CRISPR Activation Plasmid (m2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di 1700021K19Rik. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Rubicon Plasmide di attivazione CRISPR (m) | sc-432438-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
Rubicon Plasmide di attivazione CRISPR (m2) | sc-432438-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
Il gene murino 1700021K19Rik codifica Rubicon (RUN domain and cysteine-rich domain containing, proteina interagente con Beclin 1), un regolatore del traffico di membrana che modula l’autofagia e la maturazione endolisosomiale. Rubicon è noto soprattutto per limitare la fusione tra autofagosoma e lisosoma tramite interazioni con il complesso PI3K di classe III Beclin 1–VPS34 e per influenzare la fagocitosi associata a LC3, contribuendo così a plasmare la degradazione lisosomiale, l’infiammazione e le risposte cellulari allo stress. Controllando il flusso attraverso le vie autofagiche e fagocitiche, Rubicon può incidere sul controllo di qualità dei mitocondri, sulla difesa antimicrobica e sui programmi di produzione di citochine rilevanti per la neurodegenerazione, la disfunzione metabolica e la patologia immunomediata. Queste funzioni rendono Rubicon un nodo utile per analizzare come il traffico vescicolare e il turnover dipendente dai lisosomi governino l’omeostasi in diversi tipi cellulari del topo.
Rubicon Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di 1700021K19Rik senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
Rubicon Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus 1700021K19Rik nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione 1700021K19Rik, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Rubicon. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus 1700021K19Rik nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Rubicon nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Rubicon nelle cellule tumorali con espressione di 1700021K19Rik silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.