RSP3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-413513

Visão geral

RSPH3 codifica o homólogo da cabeça do raio radial 3 (RSP3), um componente estrutural do complexo de raios radiais em cílios e flagelos móveis que ajuda a acoplar a atividade das dineínas axonemais ao deslizamento coordenado dos microtúbulos e à regulação do batimento ciliar. Por meio do seu papel na arquitetura do axonema 9+2, o RSP3 favorece a geração adequada do padrão de onda e a depuração mucociliar eficiente. A perturbação da montagem ou da sinalização dos raios radiais está associada a ciliopatias de cílios móveis, incluindo fenótipos de discinesia ciliar primária caracterizados por motilidade ciliar comprometida. Como resultado, o RSPH3 é amplamente estudado em vias que governam a biogênese dos cílios, a organização do axonema e a fisiologia do trato respiratório e reprodutivo.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO RSP3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene RSPH3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do RSPH3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do RSPH3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína RSP3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de RSPH3 para a investigação da sinalização de RSP3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) RSPH3 críticos para a função RSP3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos RSPH3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo RSP3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo RSP3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus RSPH3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo RSP3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR RSP3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia RSPH3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo RSPH3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.