RPGR CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404441

概要

RPGR（網膜色素変性症GTPase調節因子）は、視細胞の連結繊毛に豊富に局在する繊毛タンパク質をコードしており、外節の維持に必要な膜結合性カーゴの繊毛内輸送（intraflagellar transport）やトラフィッキングを支えます。RPGRは繊毛関連複合体と相互作用し、繊毛の構造とシグナル伝達能を保つ微小管依存的な輸送過程に寄与します。RPGRの機能が障害されると、繊毛機能と視細胞の恒常性が乱れ、その機能喪失はX連鎖網膜色素変性症などの遺伝性網膜変性の表現型と関連づけられています。生物医学研究では、RPGRはしばしば繊毛病（ciliopathy）のメカニズム、視細胞生物学、ならびに網膜疾患における遺伝子型—表現型の関係を理解する文脈で研究されています。

RPGR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRPGR遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RPGR内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RPGRのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RPGRタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RPGRシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RPGR欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RPGRの機能に不可欠なRPGRエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RPGRゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RPGR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRPGR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RPGR遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RPGR HDRプラスミド（h）および RPGR HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRPGRホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRPGR標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。