Ros CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402450-ACT

Das humane Gen **ROS1** kodiert Ros, eine Rezeptor-Tyrosinkinase, die zelluläres Wachstum und Differenzierung über phosphorylierungsabhängige Signalübertragung reguliert. Nach Aktivierung nutzt ROS1 klassische RTK-Signalwege wie **MAPK/ERK**, **PI3K/AKT** und **JAK/STAT** und beeinflusst dadurch Proliferation, Überleben und die Dynamik des Zytoskeletts. Eine fehlregulierte ROS1-Signalgebung, häufig durch Genfusionen oder ektopische Aktivierung, ist an onkogener Transformation und Tumorprogression beteiligt und macht ROS1 zu einem zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung RTK-getriebener transkriptioneller Programme. Die ROS1-Biologie ist zudem relevant для die Erforschung von Rezeptor-Trafficking, der Regulation der Kinase-Domäne und der Umverdrahtung nachgeschalteter Netzwerke in Krebsmodellen.

Ros Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ROS1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Ros Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ROS1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ROS1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Ros-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ROS1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Ros-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Ros-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ROS1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.