Rootletin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401646

Panoramica

CROCC codifica la rootletina, una grande proteina citoscheletrica a coiled-coil che forma i rootlet ciliari associati al centrosoma e contribuisce alla coesione e all’organizzazione strutturale del centrosoma. La rootletina sostiene l’integrità del corpo basale e la ciliogenesi, collegando l’architettura centrosomiale all’organizzazione dei microtubuli e alla progressione del ciclo cellulare. L’alterazione di CROCC può compromettere le reti di segnalazione dipendenti dalle ciglia e la fedeltà mitotica, processi spesso esaminati negli studi sulle ciliopatie, sulla degenerazione retinica e sui meccanismi delle malattie proliferative. In quanto componente centrosomiale umano, la rootletina è inoltre rilevante per la ricerca sulle anomalie del centrosoma, l’instabilità cromosomica e la polarità cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rootletin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CROCC in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CROCC insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CROCC a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rootletin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CROCC per lo studio della segnalazione di Rootletin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CROCC critici per la funzione di Rootletin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CROCC per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Rootletin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Rootletin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CROCC. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Rootletin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Rootletin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CROCC per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CROCC definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.