robo1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402263-ACT

ROBO1は、Roundabout guidance receptor 1（robo1）をコードする遺伝子であり、SLITリガンドに対する膜貫通型受容体として、SLIT–ROBOシグナル伝達を介して軸索誘導、神経細胞の移動、組織パターニングを制御します。ヒト細胞では、ROBO1は下流のRhoファミリーGTPase経路を介して細胞骨格ダイナミクスと細胞運動性に影響し、方向性移動や境界形成などの過程に関与します。ROBO1の活性や発現の破綻は、発生シグナル伝達の異常や細胞浸潤プログラムの変化と関連づけられており、神経発生メカニズムや腫瘍生物学の研究において重要です。ROBO1はまた、ガイダンスキュー（誘導因子）シグナルネットワークの解析や、増殖因子・接着経路とのクロストークを調べる研究におけるマーカーおよび機能的ハブとしても用いられます。

robo1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ROBO1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

robo1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ROBO1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はROBO1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性robo1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のROBO1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるrobo1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびROBO1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるrobo1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。