RNF8 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-401909-LAC

O RNF8 humano codifica uma ligase E3 de ubiquitina do tipo RING finger que orquestra a resposta a danos no DNA ao catalisar a sinalização por ubiquitina em locais de quebras de dupla fita no DNA. Por meio de crosstalk com as vias ATM/ATR, o RNF8 promove o recrutamento e a retenção de fatores-chave de reparo, incluindo 53BP1, BRCA1 e complexos downstream dependentes de ubiquitina que regulam a ativação de checkpoints e a escolha da via de reparo. O RNF8 também está implicado na remodelação da cromatina e na manutenção da estabilidade genômica, conectando sua atividade a desfechos celulares como parada do ciclo celular, apoptose e senescência sob estresse genotóxico. A ubiquitinação dependente de RNF8 desregulada tem sido associada a fenótipos de instabilidade genômica e a alterações na sinalização de dano observadas em múltiplos contextos relevantes para o câncer e em outros distúrbios de reparo do DNA.

As Partículas de Ativação Lentivirais RNF8 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de RNF8 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais RNF8 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição RNF8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de RNF8. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo RNF8 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.