Plásmido Doble Nickase (h) RNF186: sc-408416-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)RNF186 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa RNF186 (h) y el plásmido de doble nickasa RNF186 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a RNF186. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) RNF186 | sc-408416-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) RNF186 | sc-408416-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF186 codifica una ligasa E3 de ubiquitina tipo RING localizada en el retículo endoplásmico, que ayuda a regular el control de calidad de las proteínas y la señalización al catalizar la transferencia de ubiquitina a sustratos específicos. A través del recambio dependiente de ubiquitina y de la modulación del estrés del RE y de la señalización inflamatoria, RNF186 puede influir en la homeostasis epitelial, en procesos asociados a la barrera y en vías sensibles a la respuesta inmune, como las redes vinculadas a NF-κB. Estudios genéticos y funcionales han relacionado variaciones en RNF186 y cambios en su expresión con la susceptibilidad a fenotipos inflamatorios, especialmente en contextos gastrointestinales, lo que respalda su relevancia para desentrañar las vías que conectan la proteostasis con la regulación inmunitaria de la mucosa. Como nodo de la regulación mediada por ubiquitina, RNF186 se examina con frecuencia por su impacto en la estabilidad de los sustratos, las respuestas al estrés y los programas transcripcionales posteriores en modelos de células humanas.
RNF186 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RNF186 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RNF186. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RNF186. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RNF186 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.