RNF123 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403631-NIC

RNF123は、ユビキチン依存的なプロテアソーム分解を介してタンパク質の代謝回転を制御し、ユビキチンシグナル伝達ネットワークにおける基質認識を調整するE3ユビキチン-タンパク質リガーゼをコードする。特定の制御タンパク質の安定性を制御することにより、RNF123は細胞周期の進行、細胞ストレス応答、ならびにプロテオスタシスおよびシグナル伝達に関連する経路に影響を与える。ユビキチンリガーゼ活性の撹乱は転写プログラムやチェックポイント制御を再編し得るため、RNF123は異常増殖やゲノム監視の破綻に関する機構研究において重要な結節点となる。RNF123の発現や機能の変化は、ユビキチン化を介したタンパク質恒常性制御が破綻するヒト疾患の文脈で報告されている。

RNF123 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における RNF123 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、RNF123内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、RNF123の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、RNF123が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。