RN-tre Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411321-ACT

USP6NL (RN-tre) codifica uma proteína ativadora de GTPase de Rab implicada na regulação do tráfego endocítico e da reciclagem de receptores, conectando o transporte de membrana à dinâmica de sinalização de receptores de fatores de crescimento. Ao modular a maturação e a triagem de vesículas dependentes de Rab, a RN-tre pode influenciar o controle espacial e temporal de vias como a sinalização EGFR/MAPK e a remodelação do citoesqueleto, que governam a migração e a invasão celular. Alterações na expressão de USP6NL foram relatadas em múltiplos contextos tumorais e são estudadas como determinantes de programas de tráfego de receptores que remodelam fenótipos proliferativos e de motilidade. Como regulador humano de tráfego, também é relevante para dissecar como o transporte de membrana se cruza com a transdução de sinal, a renovação de adesões e respostas celulares ao estresse.

RN-tre O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de USP6NL sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RN-tre O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus USP6NL em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição USP6NL, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RN-tre. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus USP6NL nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RN-tre no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RN-tre em células tumorais com expressão de USP6NL silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.