RMP Double Nickaseプラスミド (h): sc-406916-NIC

ヒトURI1は、非典型的プレフォルディンRBP5相互作用因子1（RMP）をコードする。RMPは、RPB5を介してRNAポリメラーゼIIに結合し、転写制御、プロテオスタシス、ならびに細胞ストレス応答に寄与する多機能因子である。RMPは、核内受容体シグナルの調節や、遺伝毒性ストレス／代謝ストレスへの応答などを含む、細胞増殖および生存経路に影響する制御ネットワークに関与する。URI1/RMP活性の変化は、増殖制御の破綻や腫瘍性シグナル伝達がみられる状況で報告されており、転写と代謝の連関を研究するうえで有用なノードとなる。URI1を実験的に解析することは、シグナル経路のリワイヤリング、タンパク質複合体ダイナミクス、そして異常な細胞状態を維持する機構の解明に資する。

RMP ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における URI1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、URI1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、URI1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、URI1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。