Rlf Double Nickase Plasmid (h): sc-410980-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Rlf Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Rlf Double-Nickase-Plasmid (h) und Rlf Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RLF abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Rlf Double Nickase Plasmid (h) | sc-410980-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rlf Double Nickase Plasmid (h2) | sc-410980-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RLF (Rearranged L-myc fusion) kodiert Rlf, ein großes nukleäres Protein, das über Wechselwirkungen mit regulatorischen Kofaktoren an der Transkriptionsregulation und an chromatinassoziierten Prozessen beteiligt ist. Rlf wird mit der Steuerung von Genexpressionsprogrammen in Verbindung gebracht, die die Aufrechterhaltung des Zellzustands, Proliferation und Differenzierung beeinflussen, was mit Funktionen in der nukleären Organisation und epigenetischen Regulation übereinstimmt. Veränderte RLF-Expression oder Störungen des Lokus wurden im Rahmen genomischer Rearrangements in Krebs beschrieben, was seine Relevanz für die Untersuchung von Mechanismen onkogener transkriptioneller Fehlregulation unterstreicht. Als menschliches Gen mit vermutlich breiter regulatorischer Reichweite wird RLF häufig untersucht, um in Zellmodellen chromatinabhängige Gensteuerung mit krankheitsassoziierten Phänotypen zu verknüpfen.
Rlf Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RLF-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RLF abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RLF-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RLF-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.