RIP/Rab Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420946

Panoramica

Agfg1 codifica RIP/Rab, un ArfGAP che collega la segnalazione dell’ADP-ribosylation factor (ARF) al traffico di membrana endocitico e all’organizzazione del citoscheletro. Attraverso la regolazione dei cicli delle piccole GTPasi, RIP/Rab contribuisce all’internalizzazione dei recettori, alla gemmazione delle vescicole e al riciclo dagli endosomi alla membrana plasmatica, processi che influenzano gli output della segnalazione dei fattori di crescita. L’alterazione di questi nodi di traffico può modificare la polarità cellulare, la migrazione e le risposte allo stress, collegando le vie dipendenti da Agfg1 a fenotipi rilevanti per la neurobiologia e per il comportamento delle cellule tumorali in sistemi modello. Negli studi sul topo, Agfg1 è quindi utile per analizzare come il traffico di membrana si intersechi con la trasduzione del segnale e con l’omeostasi cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RIP/Rab (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Agfg1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Agfg1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Agfg1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RIP/Rab.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Agfg1 per lo studio della segnalazione di RIP/Rab, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Agfg1 critici per la funzione di RIP/Rab
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Agfg1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RIP/Rab CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal RIP/Rab CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Agfg1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RIP/Rab Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR RIP/Rab (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Agfg1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Agfg1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.