Rim3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407285

Visão geral

RIMS3 codifica a molécula 3 que interage com Rab3 (Rim3), uma proteína de ancoragem (scaffold) pré-sináptica que participa da organização do aparato de liberação de neurotransmissores nas zonas ativas. Por meio de interações com GTPases Rab3 e outros componentes sinápticos, a Rim3 contribui para o acoplamento/“priming” de vesículas, a exocitose desencadeada por cálcio e a manutenção da eficácia sináptica. Mecanismos associados a RIMS3 se cruzam com vias de sinalização neuronal que regulam a transmissão e a plasticidade sinápticas, processos frequentemente implicados em fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos. A expressão alterada ou variações em RIMS3 têm sido investigadas no contexto de disfunções do sistema nervoso, tornando-o relevante para o estudo de determinantes moleculares da organização das sinapses e da atividade de redes neurais.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Rim3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene RIMS3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do RIMS3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do RIMS3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Rim3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de RIMS3 para a investigação da sinalização de Rim3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) RIMS3 críticos para a função Rim3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos RIMS3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Rim3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Rim3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus RIMS3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Rim3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Rim3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia RIMS3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo RIMS3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.