Plásmido CRISPR de Activación (h) RIG-I: sc-400812-ACT

DDX58 codifica la helicasa de ARN citosólica RIG-I, un receptor clave de reconocimiento de patrones que detecta ARN viral de doble cadena corto y ARN con trifosfato en 5′. Tras la unión del ligando, RIG-I señaliza a través de MAVS para activar las vías de IRF3/IRF7 y NF-κB, induciendo interferones de tipo I y citocinas proinflamatorias como parte de la defensa antiviral innata. Este eje se integra con programas más amplios de genes estimulados por interferón, la remodelación inmunometabólica y la comunicación cruzada con la autofagia y la apoptosis durante el estrés celular. La señalización desregulada de RIG-I se ha asociado con una respuesta antiviral alterada y fenotipos inflamatorios relevantes para la biología de las infecciones y los mecanismos de enfermedades mediadas por el sistema inmunitario.

RIG-I El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DDX58 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RIG-I El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DDX58 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DDX58, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RIG-I. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DDX58 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RIG-I en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RIG-I en células tumorales con expresión de DDX58 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.