RICK CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400731-ACT

受容体相互作用型セリン／スレオニンプロテインキナーゼ2（RIPK2；RICKとも呼ばれる）は、細胞質に存在するシグナル伝達キナーゼであり、パターン認識受容体であるNOD1およびNOD2の下流で機能する主要なアダプター分子です。細菌由来ペプチドグリカンのモチーフを感知すると、RIPK2はユビキチン依存的なシグナル伝達を介してNF-κBおよびMAPK経路を活性化し、炎症関連遺伝子の発現、サイトカイン産生、ならびに上皮細胞や骨髄系細胞との自然免疫クロストークを制御します。RIPK2はまた、ユビキチンリガーゼの制御や下流キナーゼカスケードを通じて、オートファジーや細胞ストレス応答シグナルとも連携します。RIPK2経路活性の異常は慢性炎症性の表現型や免疫介在性の病態と関連しており、宿主—微生物相互作用および炎症シグナル研究において広く研究されている重要な結節点となっています。

RICK CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RIPK2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RICK CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RIPK2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRIPK2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RICKの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRIPK2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRICK依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRIPK2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRICK経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。