Partículas Lentivirales de Activación (h2) RFX6: sc-408496-LAC-2

El gen humano RFX6 (factor regulador X6) codifica un factor de transcripción de tipo hélice alada que se une a motivos de ADN tipo X-box para controlar programas génicos necesarios para la especificación del linaje endocrino pancreático y para la maduración y el mantenimiento de las células β productoras de insulina. Actúa dentro de redes transcripcionales que regulan el desarrollo de los islotes, la secreción hormonal estimulada por glucosa y vías más amplias de regulación génica que coordinan decisiones de destino celular derivadas del endodermo. La alteración genética o la expresión desregulada de RFX6 se ha asociado con defectos congénitos del páncreas endocrino y con formas de diabetes, lo que lo convierte en un nodo clave para estudiar los mecanismos de la diabetes monogénica y la disfunción de las células de los islotes. La edición genética de RFX6 permite investigar de manera mecanística la regulación potenciador–promotor, la ocupación de la cromatina y los circuitos génicos endocrinos aguas abajo en modelos de diferenciación de células madre humanas y en sistemas relevantes para los islotes pancreáticos.

Las partículas de activación lentiviral RFX6 (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de RFX6 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral RFX6 (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción RFX6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de RFX6. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo RFX6 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.