Rfp2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403870-ACT

TRIM13（Rfp2）は、小胞体に豊富に局在するヒトのRINGフィンガー型E3ユビキチンリガーゼであり、ユビキチン化を触媒して基質をプロテアソーム分解へと導くことで、タンパク質恒常性を制御します。小胞体関連分解（ERAD）や、より広範なユビキチン–プロテアソーム系の制御に関与し、ミスフォールドタンパク質、酸化ストレス、アポトーシスに対する細胞応答に影響を与えます。シグナル伝達因子や品質管理経路を調節することで、Rfp2は細胞の運命決定を左右する炎症プログラムや生存プログラムにも影響し得ます。TRIM13の発現や活性の変化は、がん生物学や神経変性に関連するプロテオスタシス破綻の研究で報告されており、小胞体ストレスとユビキチンシグナルをつなぐ結節点としての重要性が示唆されています。

Rfp2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TRIM13の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rfp2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TRIM13 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTRIM13転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rfp2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTRIM13遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRfp2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTRIM13発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRfp2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。