Raptor Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400960-NIC

RPTOR codifica a proteína Raptor, uma subunidade central de ancoragem do complexo mTOR 1 (mTORC1) que recruta substratos e coordena sinais de nutrientes, fatores de crescimento e energia para regular a síntese proteica, a autofagia, a biogênese de ribossomos e o metabolismo lipídico. Por meio da fosforilação de efetores a jusante como S6K e 4E-BP1, a atividade do mTORC1 dependente de Raptor molda programas de crescimento e proliferação celular e integra a sinalização lisossomal ao controle anabólico. A desregulação da sinalização mTORC1/Raptor tem sido implicada em cânceres, distúrbios metabólicos e fenótipos do neurodesenvolvimento, nos quais alterações no controle translacional e na autofagia contribuem para estados celulares associados à doença. Como um nó central no eixo PI3K–AKT–mTOR e nas vias de detecção de aminoácidos, Raptor é amplamente estudada em respostas ao estresse, na homeostase mitocondrial e lisossomal e no cross-talk entre vias de sinalização.

Raptor O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus RPTOR em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de RPTOR. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função RPTOR. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com RPTOR interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.