RAI15 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405878

概要

SMYD5 は、クロマチン制御および転写制御に関与する SET ドメインおよび MYND ドメイン含有リシンメチル基転移酵素をコードしており、細胞の同一性やストレス応答を形作る状況依存的なプログラムを支えます。ヒストンや各種タンパク質のメチル化を調節することで、SMYD5 は、複製に共役したクロマチン形成や遺伝子発現ダイナミクスなど、DNA を鋳型とするプロセスに影響するエピジェネティック経路と関連づけられています。SMYD5 活性の破綻は、複数のモデル系において炎症シグナルの変調やがん原性の転写状態と関連して報告されており、腫瘍進展機構や免疫関連表現型の解明に有用な標的となります。ヒト細胞では、SMYD5 依存的ネットワークを解析することで、エピジェネティック修飾因子がシグナル入力をどのように統合し、増殖や分化を制御するのかを明確にできます。

RAI15 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSMYD5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SMYD5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SMYD5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RAI15タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RAI15シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SMYD5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RAI15の機能に不可欠なSMYD5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SMYD5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RAI15 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRAI15 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SMYD5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RAI15 HDRプラスミド（h）および RAI15 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSMYD5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSMYD5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。