Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RAGE Double Nickase Plasmid (h): sc-400284-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RAGE Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RAGE Double-Nickase-Plasmid (h) und RAGE Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AGER abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: RAGE: sc-365154
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RAGE Double Nickase Plasmid (h) | sc-400284-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RAGE Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400284-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AGER kodiert den Rezeptor für fortgeschrittene Glykierungsendprodukte (RAGE), einen multiliganden Mustererkennungsrezeptor aus der Immunglobulin-Superfamilie, der AGEs, S100-Proteine, HMGB1 und andere schädigungsassoziierte Moleküle bindet. Die RAGE-Signalübertragung verstärkt Entzündungs- und oxidativen Stress über Signalwege wie NF-κB, MAPK/ERK, JNK/p38, PI3K/AKT sowie eine Rho-GTPase-abhängige Zytoskelett-Remodellierung. Eine anhaltende Rezeptoraktivierung kann die Zytokinproduktion, die Expression von Adhäsionsmolekülen und eine veränderte Barrierefunktion fördern und verknüpft die RAGE-Biologie damit mit chronischer Entzündung und Gewebeumbau. Eine fehlregulierte AGER/RAGE-Aktivität wird mit diabetesassoziierten vaskulären Komplikationen, Atherosklerose, Neuroinflammation und tumorassoziierter Entzündung in Verbindung gebracht und ist daher ein häufiges Ziel in mechanistischen Studien zur Signalgebung der angeborenen Immunität.
RAGE Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AGER-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AGER abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AGER-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AGER-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.