Rag A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-427054

Visão geral

Rraga codifica a Rag A, uma pequena GTPase relacionada à Ras que atua em conjunto com RagB/C/D e com o complexo Ragulator para recrutar e regular o mTORC1 na membrana lisossomal em resposta a aminoácidos e à disponibilidade de nutrientes. Por meio da heterodimerização dependente de nucleotídeo, a Rag A ajuda a conectar o sensoriamento celular de nutrientes ao controle a jusante da síntese proteica, da autofagia e da reprogramação metabólica via via de sinalização do mTOR. A perturbação da sinalização das Rag GTPases está associada a alterações no controle de crescimento, nas respostas ao estresse e em programas de ativação de células imunes, tornando Rraga um ponto de entrada útil para estudar redes de sinalização dependentes de nutrientes. Em sistemas murinos, a desregulação de Rraga pode esclarecer como a sinalização centrada no lisossomo se integra à regulação transcricional e translacional em modelos fisiológicos e relevantes para doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Rag A (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Rraga em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Rraga, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Rraga na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Rag A.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Rraga para a investigação da sinalização de Rag A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Rraga críticos para a função Rag A
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Rraga para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Rag A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Rag A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Rraga. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Rag A Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Rag A (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Rraga para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Rraga definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.