Radical Fringe Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422659

Descripción general

Rfng codifica Radical Fringe, una β1,3-N-acetilglucosaminiltransferasa localizada en el aparato de Golgi que modifica los residuos de O-fucosa en repeticiones tipo EGF de los receptores Notch, ajustando así la intensidad de la señalización de Notch dependiente de ligando. Mediante una potenciación dependiente del contexto de las interacciones con ligandos tipo Delta frente a Jagged/Serrate, Radical Fringe ayuda a regular decisiones de destino celular, la formación de límites y el patrón tisular durante el desarrollo y en compartimentos adultos de células madre/progenitoras. Las alteraciones en la glicosilación mediada por Fringe pueden desplazar la salida de la vía Notch y los programas transcripcionales downstream que controlan la proliferación y la diferenciación. La señalización Notch desregulada está implicada en diversos procesos relevantes para enfermedad, lo que convierte a Rfng en un nodo útil para diseccionar fenotipos impulsados por Notch en modelos celulares e in vivo de ratón.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Radical Fringe (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rfng en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rfng junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rfng tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Radical Fringe.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rfng para la investigación de la señalización de Radical Fringe, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Rfng críticos para la función de Radical Fringe
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rfng para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Radical Fringe CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Radical Fringe CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rfng. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Radical Fringe (m) y el plásmido HDR Radical Fringe (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rfng para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rfng definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.