QPCT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405768

Panoramica

QPCT (glutaminil-peptide ciclotransferasi) è un enzima secreto e associato all’apparato di Golgi che catalizza la formazione di piroglutammato all’estremità N-terminale di proteine e peptidi, una modifica post-traduzionale in grado di influenzare la stabilità rispetto alla proteolisi, le interazioni con i recettori e la bioattività peptidica. Convertendo i residui N-terminali di glutammina o glutammato in piroglutammato, QPCT contribuisce alla maturazione proteica lungo la via secretoria e modula i contesti di segnalazione extracellulare. Questa attività si interseca con vie che regolano la processazione di ormoni peptidici e neuropeptidi, la proteostasi extracellulare e la secrezione regolata. In letteratura, un’alterata piroglutammilazione è stata collegata all’aggregazione proteica e a modifiche peptidiche associate alla neurodegenerazione, a supporto di QPCT come nodo meccanicistico per lo studio di proteoforme rilevanti per la patologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO QPCT (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene QPCT in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del QPCT insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto QPCT a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina QPCT.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di QPCT per lo studio della segnalazione di QPCT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni QPCT critici per la funzione di QPCT
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di QPCT per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal QPCT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal QPCT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus QPCT. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal QPCT Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR QPCT (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia QPCT per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio QPCT definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.