QIP1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405442-NIC

KPNA4はカリオフェリンαサブユニット4（QIP1）をコードしており、古典的な核内局在化シグナル（NLS）を認識してインポーチンβをリクルートし、核膜孔複合体を介したタンパク質移行を仲介するインポーチンαファミリーのアダプターです。核—細胞質間輸送を制御することで、KPNA4は主要な転写因子や制御タンパク質の核内アクセスを調節し、転写プログラム、細胞周期の進行、ストレス応答性シグナル伝達を形成します。KPNA4が関与する核内輸送ダイナミクスの変化は、がんに関連する文脈で、増殖や浸潤、ゲノム維持経路の制御異常と結び付けられており、DNA損傷や炎症性刺激に対する細胞応答にも影響し得ます。核輸送の中枢ノードとして、KPNA4は制御された核局在に依存する経路のつながり（配線）を解明する目的で、しばしば解析対象となります。

QIP1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KPNA4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KPNA4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KPNA4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KPNA4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。